慢病毒載體
概述
慢病毒載體系統(tǒng)是一種能非常高效的把外源基因穩(wěn)定整合到哺乳動物細胞中的載體工具。除了常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染外，目前該系統(tǒng)也是把外源基因轉(zhuǎn)入哺乳動物細胞的最常用方法之一。由于具有目的基因和啟動子選擇的靈活性以及轉(zhuǎn)染細胞類型的廣泛性兩大特點，使得慢病毒載體系統(tǒng)成為倍受歡迎的外源基因表達系統(tǒng)。
慢病毒載體來源于人類免疫缺陷病毒HIV，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族。野生型慢病毒基因組是線性雙正鏈RNA。
慢病毒重組載體構(gòu)建完成后與輔助質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染進入包裝細胞。在包裝細胞中，位于兩個長末端重復序列（LTR）之間的DNA片段會被轉(zhuǎn)錄成RNA，由輔助質(zhì)粒表達的病毒蛋白將其包裝形成病毒顆粒。包裝后的活體病毒將會被釋放到上清液中，可以直接收集或進一步濃縮病毒轉(zhuǎn)染靶細胞。
當病毒轉(zhuǎn)導靶細胞時，釋放到宿主細胞中的病毒RNA借助逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成雙鏈DNA，然后隨機整合進宿主細胞的基因組中。在病毒載體中，位于兩個LTR的DNA片段和病毒基因組都會穩(wěn)定整合到靶細胞的基因組中。
關(guān)于慢病毒基因表達載體的更多信息，請參考以下文獻。
| 參考文獻 | 主題 |
|---|---|
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| Nat Protoc. 1:241 (2006) | Production and purification of lentiviral vectors |
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